郑州圆梦助孕中心
首先不要去对号入座，血常规结果可以看出异常，但是不能直接诊断白血病，需要做进一步的检查才能确诊。如果实在担心的话，可以完善下外周血细胞形态检查，看看是否有幼稚粒细胞明显增多，没有的话基本上不考虑呢，可以放心。完善外周血细胞形态如果有异常，骨髓穿刺是最后一步，不着急。有空完善佝偻病检查，看看宝宝是否是正常的。小朋友37.5以下都是正常的。腋窝痛的话，一般病毒感染的话会引起来腋窝淋巴结肿大可能会有点痛。
ELISA样本制备指南及注意事项
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定义及介绍
ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附测定）是最基础的免疫学实验之一，其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本，实验操作步骤并不繁琐，但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值，从而供下一步分析所用，因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。
样本制备指南
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血清
全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20min，取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血，高血脂样品
2.血浆
抗凝剂推荐使用EDTA-Na
2，样品采集后30min内于2-8℃，1000×g离心15min，取上清即可检测。
3组织匀浆/组织全蛋白
用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10min，取上清检测。
其余方法：在分析天平（AL204型）上，称量50-100mg组织样本。在样本中加入5倍质量体积的含1%PMSF的1×PBS缓冲液；并用小剪刀等工具将组织样本剪碎（尽可能小块）。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开超声破碎仪，将超声破碎仪的功率调至25%，超声时间2s，间隔时间5s，总时间2min。放入样本，冰上超声3min。视样本匀浆情况调整总时长。超声完成后，将样本放于4℃或冰上裂解30min。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。
组织匀浆液或组织全蛋白中的蛋白浓度对于检测实验的影响至关重要，建议样本蛋白浓度至少1mg/mL以上，较低浓度蛋白的组织匀浆液有可能导致ELISA检测失败。
4.细胞提取液
贴壁细胞
用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5min后收集细胞；
悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10
6个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10min，取上清检测。注：留取20μL样本，用于后续BCA测定。
其余方法：
对于
贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。以2百万细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。
对于
悬浮细胞：离心收集细胞，以2×10
6细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成（5-10）×10
5细胞/管，然后再裂解。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。
5.细胞培养上清或其他生物体液
收集液体后于2-8℃，1000×g离心20min，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。注：因细胞培养基中的胎牛血清影响或其他生物体液中杂蛋白的影响，不建议进行BCA法测定样本蛋白含量。
实验细节与注意事项
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收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎，释放大量的过氧化物酶，会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）的酶促反应，造成检测结果的不确定性。
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样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃(3个月内检测)，避免反复冻融。在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。
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试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。
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检测样本的稀释推荐多步稀释法，常规稀释检测为血清/血浆检测稀释度为2倍、20倍、200倍；细胞上清稀释度为5倍、50倍、500倍；建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度。
对于稀释倍数比较大的检测样本，参考稀释方案如下：
稀释100倍：一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内，做100倍稀释；
稀释1000倍：两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍；
稀释100000倍：三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍；
每步稀释时取液量不少于3μL，稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀，避免起泡。
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若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。
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若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。
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某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。
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对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本，经BCA法测定样本蛋白含量后，建议进行蛋白浓度的统一化，避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差；例如，统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL，进行后续的稀释和检测。
人的一生总是在面临着各种各样的选择，我们总是想尽一切办法，来选择那个我们认为最为正确的答案，这样我们的努力才有方向，付出才不至于白费。
试管婴儿治疗也如是，当初在选择是否进行试管婴儿治疗的时候，我们的选择就已经开始了，而这仅仅是个开始，之后的一些关键环节中，还是会出现这样或者那样的选项，留给我们一道又一道的选择题，比如：
做几代试管?是否养囊?是否鲜胚移植等等，这些都是试管婴儿治疗过程中非常关键的步骤，需要仔细斟酌做出最为客观、理性的选择，具体来说主要有以下这几点需要做出选择：
试管婴儿代数的选择
选项A：一代
选项B：二代
选项C：三代
比较常见的就是这三代试管婴儿。
第一个选项：一代试管婴儿，指的是将精子和卵子放置于一起，由精卵自行来完成结合。需要在男方精液质量正常的前提下进行，主要针对的是女性输卵管性不孕等问题。
第二个选项：二代试管婴儿，则是指精子和卵子在人工的助力下来进行结合。如果男性方面，患有严重的少、弱、畸精症等问题，一般会选择这个选项。即由胚胎学家通过显微镜的帮助，挑选出精子当中最为“优秀“的精子，利用显微注射技术，将这位精子当中的佼佼者注入到卵子当中来促进结合。
而第三个选项呢，三代试管婴儿，则是针对有家族性遗传病的患者，或者出现过反复自然流产等问题的患者，可以在移植前对胚胎做好相应的检查，利用技术手段从中筛选出最为“健康”的胚胎进行移植，以此来实现优生优育的目的。
如何做到客观的“三选一”?我们需要结合不同代数试管婴儿的适应症来看，这是选择的依据，面对选择的时候，医生会结合患者的身体情况，选择最为适合的“选项”来进行治疗。注意：不要以为这几种试管婴儿，数字越大越先进，成功率越高，并不是这样哦!选择适合自己的，才是高成功率的有力保障。
选择养囊还是......?
选项A：卵裂期胚胎直接移植
选项B：养囊
简单理解这两个选项，对于卵裂期胚胎和囊胚，二者实际上指的是同一个胚胎的不同发育阶段，二者区别在于体外培养时间和胚胎形态存在差别，卵裂期胚胎继续培养至形成囊胚，这个过程可以很好地淘汰掉那些无发育潜能的胚胎，确保那些能够培养成囊胚的胚胎，质量更为优质。但问题是，即便是培养优质的卵裂期胚胎也存在无法形成囊胚的可能性，如果养囊失败，则有可能出现无胚胎可移植的情况，这种风险也需提前了解哦。
适合养囊的情况下养囊，并进行囊胚移植，这样的确能够在一定程度上增加妊娠的几率，但我们要知道的是，并非所有的胚胎都能够胜任养囊这个过程。是否养囊，养囊能否成功，需要面临的风险，都需要提前考虑清楚， 因此，不要盲目追求养囊，是否养囊需谨遵医嘱。
移植胚胎数的选择
选项A：移植一个胚胎
选项B：移植两个胚胎
一般来说就是这两种选项可供选择。有人认为移植两个胚胎就能生育双胞胎。实际上并非如此，移植两个胚胎，在全部着床，全部发育正常且孕期顺利度过的情况下，才有可能生育双胞胎。但多胎妊娠所带来的母亲安全风险和子代风险我们需要提前考虑到，特别是在孕周大一些的时候，多胎妊娠的风险也需提前考虑到。
而且多胎妊娠本身就属于高危妊娠，为了降低人类辅助生殖技术多胎妊娠发生率，在实施IVF时，临床医生会结合患者的具体情况，比如年龄、孕产史、健康状况、子宫病理情况以及胚胎质量与胚胎发育时期等方面来选择恰当的移植胚胎数目，作为患者谨遵医嘱来配合胚胎移植就可以了。
一般来说人们会比较一次怀孕就能生育双胞胎的情况，但我们要意识到试管婴儿治疗过程中，移植多个胚胎，可能会增加怀孕的几率，但无形中也增加了多胞胎的几率，因此，移植1个还是2个胚胎，这道选择题我们交给医生去考虑。
鲜胚冻胚选哪个?
选项A：鲜胚移植
选项B：冻胚移植
是的呢，又是一个有关于胚胎的选项，先来看看两个选项到底是怎么回事：
鲜胚：将精卵取出到体外后，培育3天形成的胚胎。
冻胚：通过胚胎冷冻保存技术将胚胎储存在-196℃液氮中的胚胎。
这道题比较好选，鲜胚移植，只要身体条件许可，就可以立即移植。而冻胚则是因为某种原因，当下无法马上完成移植的一种选择。总的来说无论哪一种胚胎都会是胚胎当中最为优秀的，因此，在成功率方面并无明显差异。
黄体支持的选择
选项A：口服
选项B：肌肉注射
选项C：Y道塞药
从临床统计来看，三种黄体支持虽然用药方式不同，但效果相差无几，不同的是用药的感受，比如长时间肌注黄体酮容易出现红肿、硬结，口服制剂会经过消化道，起效慢一些，y道给药久而久之容易出现局部不适的现象。
这几种方式各有优缺点，我们主张患者朋友在医生的指导下，综合考虑三种方式的花费、用法、体验，作出选择。还是那句话，适合自己的，才是最好的。
在试管婴儿治疗的过程当中，听医生的话，按部就班的配合好治疗，这才是获得成功的，最为明智的选择，衷心希望大家的试管婴儿治疗能够进行得更加顺利，希望大家都能尽快迎接好孕的到来。
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